柱層析 是有機(jī)合成中最常用的別離純化手段，大公司合成嘗試室一般都裝備主動(dòng)化水平比力高的別離純化東西---快速造備色譜儀(中低壓造備色譜)，在醫(yī)藥外包公司俗稱(chēng)過(guò)柱機(jī)。由名字可知，那就是個(gè)替代手工過(guò)柱的東西，他所用到的柱子我們常叫它Flash柱。除了能夠用來(lái)過(guò)硅膠正相柱，還能夠過(guò)乙腈(甲醇）/水系統(tǒng)的C18填料的反相柱，反相柱必然水平上能夠替代造備高效液相色譜，出格是大量樣品別離時(shí)，能夠節(jié)省大量成本。

往期文章: 【 柱層析手藝 】中已經(jīng)詳細(xì)介紹了濕法上樣和干法上樣，文章中次要是介紹了硅膠柱柱層析手藝，因而用過(guò)柱機(jī)過(guò)正相硅膠柱時(shí)情況類(lèi)似。

關(guān)于 乙腈(甲醇）/水系統(tǒng)的C18填料的反相柱，濕法上樣是應(yīng)用最普遍，利用最簡(jiǎn)單的上樣手藝。若是是固體樣品，只需將樣品間接消融在盡量少的溶劑中，然后注入色譜柱中即可完成上樣，而若是是液體樣品，其上樣體例則會(huì)更簡(jiǎn)單，間接將樣品注入色譜柱即可。但是濕法上樣有一些缺點(diǎn)：1、當(dāng)上樣體積增大時(shí)，樣品在色譜柱傍邊所占用的體積會(huì)增大，擴(kuò)散效應(yīng)也會(huì)明顯加強(qiáng)，招致色帶變寬，降低別離效率，純度也隨之降低；2、請(qǐng)盡量利用大極性的溶劑消融樣品，若是極性過(guò)小，樣品還沒(méi)有來(lái)得及和固定相彼此感化，就已經(jīng)被極性溶劑洗脫下色譜柱，招致保留時(shí)間不敷，洗脫不充實(shí)，別離效率大大降低。出格是極性出格大的樣品，濕法上樣后很容易間接把樣品沖出，沒(méi)有別離效果。

C18反相柱能否像正相硅膠柱一樣，拌樣后，停止干法上樣呢？

小編親試，完全能夠停止干法上樣，獨(dú)一的缺點(diǎn)就是C18填料有點(diǎn)貴，但是拌樣后的C18填料能夠沖刷清潔后能夠反復(fù)操縱。與硅膠柱的拌樣類(lèi)似，先用沸點(diǎn)較低溶劑消融樣品，參加C18硅膠后，旋干，然后將干粉轉(zhuǎn)移到空柱子中，填料上方加上篩板或脫脂棉都能夠，旋緊，將上樣柱接在反相柱上間接過(guò)柱就能夠了（建議先將反相柱平衡好，接上上樣柱后間接運(yùn)行梯度）。

反相柱干法上樣比擬濕法有以下長(zhǎng)處：一、干法上樣峰型變窄，別離效果明顯進(jìn)步。二、別的關(guān)于一些消融度較差的樣品，若是操縱濕法上樣，需要用大量的溶劑消融，因而上樣量遭到限造，若是一次上太多，別離效果很差，但干法上樣克制了此缺點(diǎn)。三、還有一些樣品濕法上樣注入反相柱后，間接從水比擬例較高的梯度起頭沖柱時(shí)，產(chǎn)物會(huì)敏捷析出，招致柱子堵住，干法上樣則很少堵柱。四、關(guān)于大極性的化合物（LCMS保留時(shí)間在0.*min以?xún)?nèi)的化合物），濕法上樣，有時(shí)間接用水相就能夠?qū)⒒衔餂_出，用干法上樣則能夠明顯進(jìn)步柱效以及別離樣品純度。

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